高效液相色譜儀的衍生化技術

2023-07-19 11:06

  高效液相色譜儀(HPLC)衍生化技術是指普通檢測方法不能直接檢測或檢測低靈敏度物質,并與某些試劑(即衍生試劑)反應,使其形成易于檢測的化合物的過程。根據派生方法,可分為柱前派生和柱后派生。

  一、柱前衍生化:

  柱前衍生化是指將被測物體轉換為可驗證的導數,然后用色譜柱分離。

  這種衍生化可以在線衍生化,即被測物和衍生試劑通過兩個輸液泵被泵入混合器,立即混合反應,然后進入色譜柱;被測物和衍生試劑可以先反應,然后作為一種樣品注入?;蛄鲃酉嗫杉尤胙苌噭?,取樣后,供試品及流動。相位是直接推導出來的。


高效液相色譜儀的衍生化技術

高效液相色譜儀的衍生化技術


  二、柱后衍生化:

  柱后衍生指的是被測物的分離,然后將色譜柱上的溶液與衍生試劑在線混合,形成可驗證的導數,然后引入檢測器。根據衍生物的種類,可分為紫外-可見衍生物、熒光衍生物、拉曼衍生物和電化學衍生物。

  1、紫外可光見衍生化:

  主要研究結果如下:(1)UV衍生物是指有機化合物與具有紫外吸收基團的衍生試劑發生弱或無紫外吸收的反應,形成能被UV檢測到的化合物。例如,胺很容易與鹵代烴、羰基和?;苌锓磻?。

  (2)可見光衍生物有兩個主要用途:一是利用過渡金屬離子檢測過渡金屬離子,過渡金屬離子與著色劑反應生成有色配合物。用可見光探測螯合物或離子締合物。第二,用于有機離子的檢測。在流動相中加入被測離子的反離子后,形成有色離子對化合物,并對其進行分離和檢測。

  2、熒光衍生化:

  熒光衍生化是指檢測受試物與熒光衍生化試劑反應產生的熒光物質。

  一些熒光衍生試劑本身沒有熒光,但它們的衍生物有很強的熒光。

  衍生化技術不僅使高效液相色譜儀分析系統復雜化,而且耗費時間,增加了分析成本。一些衍生反應也需要嚴格控制反應條件。因此,只有在找不到一種簡便、靈敏的檢測方法或為了提高分離和檢測的選擇性時,才考慮衍生化技術。